中国线虫学研究（第七卷）

本书是关于我国植物线虫研究进展的论文集。内容涉及植物线虫的形态学、鉴定、分子诊断、植物线虫的生物多样性、线虫生物学和致病性、线虫分子生物学等各个方面，基本反映了我国植物线虫雪灾相关淋浴的基础理论、应用技术以及病害综合防治方面的*研究进展。 

彭德良，男，湖南长沙人，博士，研究员，博士生导师，公益性行业（农业）科研专项首席专家，植物线虫课题组主持人。1984年7月获华中农业大学学士学位，1987年8月获中国农科院硕士学位，同年留中国农科院植保所工作，2001年7月获中国农业大学博士学位。任中国植物病理学会常务理事、副秘书长、中国植物病理学会植物病原线虫专业委员会主任，靠前线虫学会执行理事，《中国植物病理学报》编委，全国植物检疫性有害生物审定委员会委员，中国生物技术学会生物安全分会理事,中国动物学会寄生虫专业委员会理事。廖金铃1962年出生。中国植物病理学会植物线虫专业委员会主任委员、国际线虫学会联盟（IFNS）理事、中国植物病理学会理事、华南农业大学资源环境学院植物病理系主任。

不同土壤质地及氮磷钾对旱稻孢囊线虫发生的影响周建宇等(1)
甘薯象耳豆根结线虫的初报高波等(6)
不同小麦品种和药剂拌种对燕麦孢囊线虫发生的影响王蕾等(12)
简单香豆素对植物病原线虫的毒杀作用闫继辰等(18)
安徽省首次发现竹螺旋线虫（Helicotylenchus bambesae）杨青等(24)
青海省春麦区禾谷孢囊线虫经济阈值研究侯生英等(28)
杧果根际1种巴兹尔属垫刃线虫（Basiria sp）的鉴定乔凯凯等(36)
茶皂素在植物中的内吸特性研究王艳丽等(41)
北京市蔬菜根结线虫种类鉴定刘艳珂等(46)
江西九江水稻根结线虫病发生情况简报张晓阳等(51)
6%噻唑膦·寡糖水乳剂对香蕉根结线虫防控效果曾锦冰等(54)
五种药剂对番石榴根结线虫防治效果研究于洋飞等(57)
植物线虫生防细菌和毒力蛋白研究进展叶姗等(61)
线虫溶菌酶的研究进展王宁等(67)
分子标记用于马铃薯线虫鉴定及遗传多样性的研究李云卿等(74)
植物激素在植物与线虫互作的研究进展雷飘等(80)
重要植物寄生线虫效应蛋白功能研究进展坚晋卓等(86)
滑刃线虫属植物寄生性种类的多样性和系统进化研究蔡晶晶等(90)
短体线虫属种类的分子检测研究进展王亚东等(95)
大豆孢囊线虫效应因子与寄主大豆相互作用的研究进展赵洁等(101)
短体线虫Pratylenchus sp非中国种问题初探边勇等(106)
浅析口岸线虫检测要点边勇等(111)
根结线虫的防治技术研究进展刘莹等(116)
植物抗线虫基因及其作用机制研究进展葛逢勇等(122)
食细菌线虫对细菌多样性和土壤生态功能影响的研究进展潘凤娟等(128)
大豆抗根结线虫的分子遗传标记研究进展王从丽等(134)
Root Knot Nematode Effectors:an Emerging Paradigm of ParasitismP Abad(142)
Ultrastructures，Biogeography，and Molecular Taxonomy of Criconemoides myungsugae and Cparvus（Nematoda：Longidoridae）from ChinaMunawar MARIA et al(143)
来自中国的长针线虫科不同属种间超结构和分子分类学新见解蔡瑞杭等(144)
生防制剂禾力素不同处理方式对大豆孢囊线虫病及根腐病的影响陈井生等(145)
氟吡菌酰胺拌种对玉米短体线虫病的防治效果迟元凯等(146)
河南省烟草寄生线虫的发生分布调查李豪等(148)
细尖潜根线虫Actin蛋白基因克隆与序列分析唐子清等(150)
Identification and Biological Characteristics of Purpureocillium lilacinum Strain PLHN
Fan Ruiqi et al(151)
马铃薯腐烂茎线虫Ddmel26基因的RNAi功能分析高波等(152)
马铃薯腐烂茎线虫Ddunc87基因的RNAi致死效应分析高波等(154)
植物栽培介质中线虫的检测鉴定葛建军等(156)
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测根结线虫龙海等(157)
黑曲霉NBC001对大豆孢囊线虫防治机制初步研究金娜等(158)
不同温度条件下小麦落选短体线虫的存活能力李秀花等(160)
不同小麦品种（系）对禾谷孢囊线虫的抗病性李秀花等(162)
河北省小麦根腐线虫病的发生与分布李秀花等(164)
抗孢囊线虫病大豆新品种抗线12的培育与鉴定李泽宇等(166)

前言
为了坚定不移贯彻创新、协调、绿色、开放、共享的发展理念，落实创新驱动发展战略、乡村振兴战略和可持续发展战略，我国植物线虫科技工作者面向世界农业科技前沿、面向国家重大需求、面向现代农业建设主战场，深入生产线解决生产中出现的线虫病害问题，在基础研究和应用研究两个方面均取得长足的进步，在植物线虫早期诊断和检测、生物学、生态学、致病分子机制、生物防治、种质资源抗性、综合治理技术等方面取得突出进展，受到国内外同行的高度关注。特别是近年来我国线虫专家获得国家973计划资助和国家自然科学基金资助开展农作物线虫的基础研究，公益性行业（农业）科研专项连续资助开展作物孢囊线虫研究和蔬菜根结线虫综合治理技术研究，对发展我国植物线虫学科发展和人才队伍建设具有重要推动作用。
《中国线虫学研究》（第七卷）共收集了国内外80余篇研究论文、综述和摘要简报，内容涉及植物线虫种类鉴定、检测技术、发生分布、生物学、线虫效应子、检疫性线虫、生物防治、化学防治、综合治理技术等线虫学研究的各个主要方面。反映了近两年来我国植物线虫学工作者在相关领域的基础理论、应用基础以及线虫病害综合治理方面的研究成果。
本书出版得到国家公益性行业（农业）科研专项经费项目“作物孢囊线虫综合治理技术方案”（201503114）的资助，同时得到中国农业科学院植物保护研究所、植物病虫害生物学国家重点实验室、河北省农林科学院植物保护研究所、华北北部作物有害生物综合治理重点实验室、深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心、佛山市盈辉作物科学有限公司、拜耳作物科学（中国）有限公司、广东真格生物科技有限公司等单位的资助与支持，中国农业科学技术出版社对本书的出版给予了大力帮助。在此，我们表示衷心的感谢！
 在编辑文稿时，本着文责自负及论文规范性要求进行收录整理，对个别文句进行了修改。由于时间仓促，错误和不足之处难免，敬请作者和读者批评指正。

编者2018年7月

甘薯象耳豆根结线虫的初报中国线虫学研究(第七卷),2018，7：6～11
Nematology Research in China,2018,Vol7：6～11
甘薯象耳豆根结线虫的初报基金项目：国家自然科学基金(31501616；31401721)；国家甘薯产业技术体系(CARS-10-B16)；河北省自然科学基金（C2015301043）
高波作者：高波，助理研究员，从事植物寄生线虫学研究;Email：gaobo89@163com，马娟，王容燕，李秀花，陈书龙通信作者：陈书龙，研究员，从事植物寄生线虫学研究;Email：chenshulong65@163com

（河北省农林科学院植物保护研究所，河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心，农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室，保定071000）

摘要：甘薯寄生线虫病是甘薯生产上严重病害之一，特别是在我国长江中下游和南方薯区，根结线虫为害较重，本研究应用分子生物学手段对来自广东湛江和重庆甘薯上的根结线虫种类进行了鉴定。通过利用根结线虫属通用引物MF/MR，以及南方根结线虫特异引物MiF/MiR，爪哇根结线虫特异引物Fjav/Rjav和象耳豆根结线虫特异引物MeF/MeR初步鉴定结果表明两地的根结线虫均为象耳豆根结线虫，进一步对28S rRNA D2D3区域和rDNAIGS2区域进行Blast比对和系统发育分析，终确定来自两地的发病薯块的病原线虫均为象耳豆根结线虫。
关键词：甘薯；象耳豆根结线虫；分子鉴定；特异引物

Preliminary Study on RootKnot Nematode Meloidogyne enterolobii in Sweet Potato in China
Gao Bo，Ma Juan，Wang Rongyan，Li Xiuhua，Chen Shulong
(Plant Protection Institute of Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences；IPM centre of Hebei Province；Key Laboratory of IPM on Crops in Northern Region of North China，Ministry of Agriculture；Baoding071000，China)

Abstract：Parasitic nematode disease of sweet potato is one of the most serious diseases on sweet potato productionThe species of root knot nematodes in sweet potatoes from Zhanjiang，Guangdong and Chongqing were identified by molecular biological methodsBy using the root knot nematode universal primers MF/MR，Meloidogyne incognita specific primers MiF/MiR，Mjavanica specific primers Fjav/Rjav and Menterolobii specific primers MeF/MeR，the nematodes from both places were preliminary identified as MenterolobiiFurther based on Blast alignment and phylogenetic analysis of the 28 s rRNA D2D3 and rDNA  IGS2，the pathogenic nematodes of the diseased sweet potatos from these two places were finally confirmed as Menterolobii
Key words：Sweet potato；Menterolobii；Molecular biological methods；Specific primers

甘薯（Ipomoea batatas Lam）在我国是继小麦、水稻、玉米、大豆之后的第五大粮食作物，种植面积和总产量分别占世界的70%和85%左右，常年种植面积在700万hm2左右，是世界上主要的生产国［1］。但是甘薯病虫害的发生却严重地制约着我国甘薯的产量和品质。
甘薯寄生线虫病是甘薯上发生严重的病害之一，目前在我国已报道的甘薯寄生线虫包括：马 铃 薯 腐 烂 茎 线 虫（Ditylenchus destructor)［2］、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、高弓根结线虫(Macrita)、花生根结线虫(Marenaria）［3］、矮化线虫（Tylenchorhynchus spp）、短体线虫(Pratylenchus spp)、肾形线虫(Rotylenchulus spp)、盘旋线虫(Rotylenchus spp)、螺旋线虫(Helicotylenchus spp)、盾状线虫(Scutellonema spp)、孢囊线虫(Heterodera spp)、针线虫(Paratylenchus spp)、半穿刺线虫(Tylenchulus spp)、滑刃线虫(Aphelenchoides spp)、剑线虫(Xiphinema spp)、矛线虫(Dorylaimus spp)［4］等。而未见有象耳豆根结线虫（Menterolobii）［5］田间侵染甘薯的报道，本研究从广东湛江和重庆的甘薯薯块中发现了根结线虫的侵染，后经分子水平的鉴定证明该根结线虫为象耳豆根结线虫，这是该线虫侵染我国甘薯的首次报道。
1材料和方法
11试验材料
   从广东湛江和重庆采集的甘薯薯块，2×Es Taq MasterMix、Gel Extraction Kit、PurePlasmid Mini Kit均购自于康为世纪，T4 DNA Ligase、pMD18T购自于大连宝生物，感受态细胞DH5α、水浴锅、恒温摇床、超净台、恒温培养箱。
12试验方法
121卵囊的剥离与孵化
   将受侵染薯块和薯根中的卵囊在显微镜下拨出，置于盛有灭菌水的培养皿中并于25℃孵化培养5～7d，即得到象耳豆根结线虫的二龄幼虫。
122线虫DNA的提取
线虫DNA的提取参考李君实等［6］的方法，向PCR反应管中加入14μL灭菌的双蒸水，然后挑入幼虫1头，用细针刺破搅碎，加入3μL 10×PCR bufer和3μL蛋白酶K（600μg/mL），使总体积为20μL；放入-20℃的冰箱低温处理10min以上，然后放入PCR仪中于65℃下温育15h，95℃下温育10min；取出12 000r/min离心1min，上清DNA于-20℃下保存。
123目的基因的扩增
首先利用根结线虫属的28S rRNA的D2D3区通用引物MF/MR（序列见表1）进行PCR扩增鉴定，再利用南方根结线虫特异引物MiF/MiR，爪哇根结线虫特异引物Fjav/Rjav以及象耳豆根结线虫特异引物MeF/MeR进行进一步的验证。表1鉴定引物及其序列信息［7］
引物名称引物序列MFGGGGATGTTTGAGGCAGATTTG通用引物MRAACCGCTTCGGACTTCCACCAGMiFGTGAGGATTCAGCTCCCCAG南方根结线虫MiRACGAGGAACATACTTCTCCGTCCFjavGGTGCGCGATTGAACTGAGC爪哇根结线虫RjavCAGGCCCTTCAGTGGAACTATACMeFAACTTTTGTGAAAGTGCCGCTG象耳豆根结线虫MeRTCAGTTCAGGCAGGATCAACC