免疫技术(王晓杰)（第二版）

本教材按理实一体化架建内容体系，共设计了9个项目，31个工作任务，包括项目一免疫技术基础技能训练、项目二大肠杆菌E.coli抗原的制备、项目三免疫血清的制备、项目四抗原抗体反应的临床检验、项目五血清中补体的检测、项目六免疫标记技术检测植物病毒、项目七鸡胚流感疫苗的制备、项目八人体免疫球蛋白的制备、项目九金标免疫诊断试剂盒的制备。附录为相关药品管理法律法规。教材配套有网络课程资源。本教材适合职业院校生物技术、生物制药、医学检验等专业师生使用，也可供相关技术人员参考，或作为行业培训教材使用。

项目一免疫技术基础技能训练1

项目介绍1

学习指南1

一、项目准备1

（一）知识准备1

（二）技能准备11

二、项目实施18

任务一识别人体免疫器官和免疫细胞发育过程18

任务二动物注射和采集血液18

任务三分离T淋巴细胞、B淋巴细胞23

三、项目拓展24

要点解读26

项目思考27

项目二大肠杆菌E.coli抗原的制备28

项目介绍28

学习指南28

一、项目准备28

（一）知识准备28

（二）技能准备36

二、项目实施39

任务一大肠杆菌E.coli外膜蛋白OMP抗原的制备39

任务二大肠杆菌E.coli脂多糖LPS的制备40

三、项目拓展42

（一）细胞性免疫原的制备42

（二）佐剂的使用方法42

要点解读43

项目思考45

项目三免疫血清的制备46

项目介绍46

学习指南46

一、项目准备46

（一）知识准备46

（二）技能准备55

二、项目实施58

任务一抗伤寒杆菌血清的制备58

任务二抗绵羊红细胞血清的制备（溶血素的制备）60

任务三抗人血清抗体的制备61

三、项目拓展61

（一）免疫球蛋白基因的结构和抗体多样性61

（二）人类免疫球蛋白的主要理化性质和生物学特性比较64

（三）免疫应答65

（四）免疫耐受69

要点解读70

项目思考71

项目四抗原抗体反应的临床检验73

项目介绍73

学习指南73

一、项目准备74

（一）知识准备74

（二）技能准备81

二、项目实施89

任务一ABO血型鉴定89

任务二玻片凝集反应检测未知细菌90

任务三布氏杆菌病平板凝集反应91

任务四环状沉淀反应测定血清效价92

任务五单向琼脂扩散检测人血清中的免疫球蛋白93

任务六双向琼脂扩散试验检测未知细菌94

任务七免疫电泳实验检测抗原96

任务八对流免疫电泳检测人血清97

任务九火箭电泳试验检验血清中抗原的含量98

三、项目拓展99

（一）血型的概念99

（二）血型的种类99

（三）ABO血型系统的遗传101

（四）相容的血型101

要点解读102

项目思考103

项目五血清中补体的检测105

项目介绍105

学习指南105

一、项目准备105

（一）知识准备105

（二）技能准备116

二、项目实施118

任务一观察溶血反应118

任务二补体结合实验119

任务三血清总补体溶血活性(CH50)测定121

任务四透射比浊法测定血清C3含量122

三、项目拓展123

（一）补体C4溶血活性的测定(试管法)123

（二）补体介导的细胞毒试验123

要点解读125

项目思考125

项目六免疫标记技术检测植物病毒127

项目介绍127

学习指南127

一、项目准备127

（一）知识准备127

（二）技能准备134

二、项目实施135

任务一酶标抗体（抗原）的制备135

任务二双抗体夹心法诊断植物病毒137

任务三直接免疫荧光法测抗原139

任务四间接免疫荧光法测抗体140

三、项目拓展141

（一）过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物制备技术141

（二）McAb-PAP制备技术141

（三）碱性磷酸酶标记抗体制备技术142

（四）碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物制备技术142

（五）荧光免疫检测补体结合法142

（六）荧光免疫检测双标记法143

（七）荧光免疫标记技术应用143

（八）化学发光免疫标记技术143

要点解读145

项目思考146

项目七鸡胚流感疫苗的制备147

项目介绍147

学习指南147

一、项目准备147

（一）知识准备147

（二）技能准备151

二、项目实施153

任务鸡胚流感疫苗的制备153

（一）鸡胚流感疫苗简介153

（二）鸡胚流感疫苗制备154

三、项目拓展155

（一）其他流感灭活疫苗155

（二）人工主动免疫156

（三）细菌类疫苗157

要点解读160

项目思考162

项目八人体免疫球蛋白的制备163

项目介绍163

学习指南163

一、项目准备163

（一）知识准备163

（二）技能准备165

二、项目实施168

任务一Cohn法制备人体免疫球蛋白168

（一）Cohn法制备人体免疫球蛋白简介168

（二）人体免疫球蛋白制备168

任务二牛血清免疫球蛋白的制备170

三、项目拓展172

（一）蛋白质纯化方法172

（二）透析袋的处理方法173

要点解读173

项目思考174

项目九金标免疫诊断试剂盒的制备175

项目介绍175

学习指南175

一、项目准备175

（一）知识准备175

（二）技能准备176

二、项目实施178

任务一胶体金的制备178

任务二胶体金标记蛋白的制备181

任务三胶体金诊断试剂盒的制备182

三、项目拓展183

（一）诊断试剂183

（二）酶联免疫吸附诊断试剂盒生产工艺183

（三）PCR诊断试剂生产工艺183

要点解读184

项目思考184

附录相关药品管理法律法规186

一、冻干静注人免疫球蛋白(pH4)186

二、A群脑膜炎球菌多糖疫苗189

三、皮内注射用卡介苗193

四、冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）197

五、重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）201

六、流感全病毒灭活疫苗205

七、脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(人二倍体细胞）209

八、冻干肉毒抗毒素214

九、抗眼镜蛇毒血清217

十、抗人T细胞兔免疫球蛋白220

十一、乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法）224

十二、人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）226

参考文献229

 

前言

免疫技术作为现代生命科学研究的三大前沿技术之一，广泛应用在生物学研究、临床医学检验、生物制品等各个领域，是生物技术应用专业、生物工程专业和临床医学专业学生必修的一门专业课程，也是学生从业后应用的主要技术之一。生物技术的飞速发展带动了对生物及相关专业高职高专层次学生的需求，从而形成了对高品质免疫技术教材的需求。但是，目前关于免疫的书籍大部分是介绍免疫学基础知识的，从免疫技术相关岗位出发、综合讲解免疫技术的教材还较少，且大都是针对本科层次编写的。本教材版出版后受到广大师生的欢迎，根据用书师生反馈和行业、专业发展要求，编者们开展了对《免疫技术》版教材的修订编写工作。

修订工作依据免疫产品生产和免疫检验相关岗位对免疫技术知识和技能的要求，结合高职高专基于工作过程的课程体系改革的实践，从实际产品和技术出发，构建了“适度、够用”的系统理论知识和技能体系。修订工作的重点集中在以下几方面：

其一，以企业人才岗位需求为依托，保证教材的“行业性和先进性”，调整教学项目和项目载体。

修订教材共九个项目，对原有教材的教学项目和项目载体进行了调整，如：将项目四——凝集反应检测ABO血型和项目五——沉淀反应检测血清效价合并为项目四——抗原抗体反应的临床检验；根据临床检验的发展，增加项目五——血清中补体的检测；将项目六——酶联免疫吸附试验检测植物病毒和项目七——荧光免疫检测猪瘟病毒合并为项目六——免疫标记技术检测植物病毒。这样更有利于学生对免疫技术整体知识体系的构建，为学生今后从事免疫技术相关工作夯实理论基础，培养良好的职业素养、职业意识和使命感。

其二，调整项目内容中编排顺序，既兼顾了学生知识体系构建，又兼顾了基于工作过程的学生认知规律。原有教材编写顺序为“项目实施→项目思考→和拓展知识”，在实施过程中查找和拓展知识，掌握知识点比较凌乱。为遵循学生的认知规律，修订版本编写顺序调整为“项目介绍→学习指南→以分解任务形式实施项目→在项目实施中穿插理论知识→在项目实施后进行项目思考和答疑→项目准备（知识 技能准备）→项目完成后的理论知识拓展→要点解读中重构项目，形成理实一体化架构体系”，该教材编写模式与“教学做一体”的教学模式相辅相成。

其三，配套的《免疫技术》北京市精品课程网站作为数字化平台支撑，便于学生课下自主学习。为方便学生在线学习，拓展学生专业学习路径，加强师生交流，《免疫技术》建设了内容丰富的网络课程，该课程获评为2008年北京市精品课程。

其四，从学生出发，以学生为中心，提升教材的可阅读性，增加了细节处理。修订版本中增加了细节内容，如：学习目标中增加了介绍学习方法；增加了要点解读，提示学生难点和重点，帮助学生理解；增加了“知识体系构建”形成的知识体系图和专业词汇中英文对照。这些细节处理，能帮助学生更好地理解和掌握所学知识。

修订版教材由北京电子科技职业学院王晓杰和张虎成任主编，全书分为9个项目，按照由简单到复杂、由单项到综合的层次排布，包括项目一免疫技术基础技能训练、项目二大肠杆菌E.coli抗原的制备、项目三免疫血清的制备、项目四抗原抗体反应的临床检验、项目五血清中补体的检测、项目六免疫标记技术检测植物病毒、项目七鸡胚流感疫苗的制备、项目八人体免疫球蛋白的制备、项目九金标免疫诊断试剂盒的制备。附录为相关药品管理法律法规，将针对正文部分的相关法规提供给读者参考，使读者更好地理解正文部分的内容。

本书在修订过程中，得到了化学工业出版社的大力支持和热情帮助。同时，得到了河南牧业经济学院李存法、漯河职业技术学院党卫红、广东轻工职业技术学院张冬青、北京电子科技职业学院金丽华和杨军、北京赛百泰生物技术有限公司杨春花、北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司李明刚、北京天坛生物制品股份有限公司沈永才等各位参编老师们的大力支持配合，使得教材编写工作完成得愉快、严谨和有序。

由于编者的知识和能力有限，在教材编写中还存在不足之处，敬请同行专家、使用本教材的师生和广大读者批评指正。

编者

2018年3月

版前言

免疫技术作为现代生命科学研究的三大前沿领地之一,广泛应用在生物学研究、临床医学检验、生物制品等多个领域，是生物技术应用专业和生物工程专业学生必修的一门专业课程和从业后应用的主要技术之一。生物技术飞速发展带动了对生物技术类专业高职高专层次学生的需求，从而形成了对高品质高职高专免疫技术教材的需求。但是，目前关于免疫的书籍大部分是介绍免疫学基础知识的，综合性的、系统性的、专门讲解免疫技术的教材非常少，且教材大都是针对本科高等教育编写的，本教材就是在这种情况下组织编写的。

本教材依据免疫产品生产和免疫检验相关岗位对免疫技术技能的要求，结合高职高专基于工作过程的课程体系改革的实践，从实际产品和技术出发，形成“适度、够用”的系统理论知识。

本教材由北京电子科技职业学院教师王晓杰和张虎成共同主编，全书分为十个项目，按照由简单到复杂、由单项到综合的层次排布，并分为三个平台。个平台为基础研究平台，包括项目一免疫技术基础技能训练、项目二大肠杆菌E.coli抗原的制备、项目三免疫血清的制备，三个项目集中讲解免疫技术的基础知识和基础技能。第二个平台为免疫检测平台，包括项目四凝集反应检测ABO血型、项目五沉淀反应检测血清效价、项目六酶联免疫吸附试验检测植物病毒、项目七荧光免疫检测猪瘟病毒、四个项目集中讲解免疫检验技术。第三个平台为免疫技术产品平台，包括项目八鸡胚流感疫苗的制备、项目九人体免疫球蛋白的制备、项目十金标免疫诊断试剂盒的制备，三个项目集中讲解免疫技术产品的制备。

本书在编写过程中，得到了化学工业出版社的大力支持和热情帮助。同时，得到了北京科技职业学院杨春花、漯河职业技术学院党卫红、广东轻工职业技术学院张冬青、北京吉利大学董志刚、北京电子科技职业学院李双石、北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司李明刚、北京天坛生物制品股份有限公司沈永才、黑龙江农垦职业学院王义军、郑州职业技术学院张玲丽、中国科学院微生物研究所胡坤等各位参编老师的积极配合，使得教材编写工作完成得愉快、严谨和有序，在此，对化学工业出版社和参与编写与评审的各位老师致以诚挚的感谢。

由于编者的知识和能力有限，在教材编写中难免存在不足之处，敬请广大同行专家、使用本教材的师生和其他读者批评指正。

王晓杰  张虎成

2010年5月